疏水作用介質(zhì):

疏水作用層析是根據(jù)分子表面疏水性差別來分離蛋白質(zhì)或多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。選擇疏水作用層析介質(zhì)的關(guān)鍵在于選擇合適的疏水強弱的配基，若蛋白質(zhì)的疏水性較強就選擇較弱的疏水介質(zhì)，反之亦然，為了增強蛋白質(zhì)和疏水介質(zhì)的結(jié)合需要再緩沖液中加入一定量的鹽（通常是硫酸銨）。若蛋白質(zhì)本身的疏水性質(zhì)較強，就不需要加太多的鹽，為了提高分辨率可以選擇顆粒較小的疏水作用介質(zhì)。

影響疏水作用的因素:

(1)鹽種類及濃度

組成緩沖液中鹽的某些離子對蛋白質(zhì)的構(gòu)象有穩(wěn)定作用，如SO42-可提高蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，是蛋白的溶解度下降，對蛋白有鹽析效應(yīng)，使蛋白同配基間疏水作用增強。還有些離子對于蛋白質(zhì)構(gòu)象具有不穩(wěn)定作用，如Cl-、Ca2+可增加蛋白質(zhì)的溶解度，這類例子洗脫能力較強。鹽析和鹽溶的特性可作為選擇疏水介質(zhì)平衡和洗脫條件的依據(jù)。

(1)溫度

疏水層析過程中，溫度升高，生物大分子的構(gòu)象發(fā)生變化，疏水作用增強，有利于提高層析柱額分離度，但對生物活性物質(zhì)來說，高溫條件會使其變性失活，因此疏水層析通常在常溫或低溫進行，建議在恒溫條件下進行疏水層析，避免溫度的變化對于層析結(jié)果的影響。

(1)pH

疏水層析流動相的pH通常為中性的磷酸鹽緩沖液。蛋白質(zhì)同疏水基團的作用力隨pH升高而降低，因為蛋白質(zhì)的酸性基團隨pH升高所帶電荷逐漸增多，親水性增強。但在疏水層析中通常不采用改變?nèi)芤旱膒H來改變蛋白質(zhì)的疏水性。